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人結(jié)蛋白ELISA試劑盒操作步驟
更新時(shí)間:2024-08-27   點(diǎn)擊次數(shù):307次

    人結(jié)蛋白ELISA試劑盒操作步驟在完成了人結(jié)蛋白ELISA試劑盒的前期準(zhǔn)備工作,包括試劑的預(yù)溫、樣本的稀釋與處理之后,接下來便是實(shí)驗(yàn)的核心步驟——加樣與孵育。

    首先,輕輕搖晃ELISA板,確保孔內(nèi)無氣泡,并準(zhǔn)確吸取預(yù)設(shè)體積的待測樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加入相應(yīng)的孔中。每個(gè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)設(shè)置至少一個(gè)復(fù)孔以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。注意更換槍頭以避免交叉污染,這是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵一步。

    隨后,加入等量的生物素標(biāo)記的檢測抗體至每個(gè)孔中。輕輕晃動(dòng)ELISA板,使抗體與樣本充分混合,隨后將板置于恒溫培養(yǎng)箱或適宜的溫育條件下進(jìn)行孵育。孵育時(shí)間需嚴(yán)格按照試劑盒說明書執(zhí)行,以確保抗原抗體反應(yīng)達(dá)到最佳狀態(tài)。

    孵育結(jié)束后,輕輕吸去孔內(nèi)液體,注意不要觸及孔底,以免損失已結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物。隨后,用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌ELISA板數(shù)次,以去除未結(jié)合的抗體和其他雜質(zhì)。洗滌過程應(yīng)充分且溫和,避免產(chǎn)生氣泡或造成孔間交叉污染。

   完成洗滌后,向每個(gè)孔中加入適量的酶標(biāo)親和素工作液,再次進(jìn)行孵育。這一步驟的目的是通過酶標(biāo)親和素與生物素標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)復(fù)合物,為后續(xù)的檢測反應(yīng)做準(zhǔn)備。

    至此,人結(jié)蛋白ELISA試劑盒的操作已接近尾聲,但每一步都至關(guān)重要,需嚴(yán)格按照操作指南執(zhí)行。接下來的步驟將涉及底物顯色和終止反應(yīng),最終通過酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度值,進(jìn)而計(jì)算出樣本中人結(jié)蛋白的濃度。敬請(qǐng)期待后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及討論。

 

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